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液相色譜儀的日常維護和故障排除
封躍鵬 邱赫男
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來源：«分析儀器 »
1日常維護
1．1 泵
泵是液相色譜儀的心臟，須精心維護和保養(yǎng)。處于良好工作狀態(tài)的泵，其基線平穩(wěn)，保留時間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時壓力變化緩慢而平穩(wěn)。要使泵具備良好的操作性能，應(yīng)該保持泵系統(tǒng)的清潔。具體做法如下：
（1）要選擇優(yōu)質(zhì)的容劑和試劑，在進入儀器前用 0。45um 膜過濾，并進行脫氣處理。
（2）泵開始使用時，一定要用合適的流動相徹底清洗干凈。
（3）定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，并經(jīng)常清洗進液處的微孔濾頭。
（4）改變流動相時，應(yīng)避免沉淀產(chǎn)生，以防止泵堵塞。
1．2色譜柱
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱應(yīng)具有很高的塔板數(shù)，且儀器基線平
穩(wěn)。色譜柱比較嬌氣，在平時的工作中須注意以下事項：
（1）色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強烈震蕩；安裝時，一定要保證閥件或管路的清潔。
（2）流動相在使用前必須進行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動相。
（3）在滿足靈敏度的情況下，盡可能使用小進樣量。如果樣品比較"臟"，要進行凈
化或提純處理。
（4）分析結(jié)束語后，要清洗掉進樣閥中殘留的樣品，并用流動相或適當?shù)娜軇┣逑瓷V柱。
（5）如色譜柱長期不用，應(yīng)該用適當?shù)挠袡C溶劑保存并封閉或定期給柱子補充合適的流動相。
1．3 檢測器
對于紫外檢測器，在分析柱平衡的差不多時，開啟檢測器；在分析完成后，馬上關(guān)閉
檢測器。
1．4
2 進樣器
分析結(jié)束后，應(yīng)反復(fù)沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。
常見故障的分析與排除
既使日常精心維護的液相色譜儀，隨著使用時間的增加或使用者經(jīng)驗不足也會出現(xiàn)一
些問題或故障�，F(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下：
2．1
保留時間變化
保留時間的變化有三中情況：波動、縮短、延長。
保留時間出現(xiàn)波動時，應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài)，如果設(shè)置為室溫，氣溫的變化
會引起保留時間的波動，應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度；等度和梯度間還沒有充分達到平衡狀態(tài)時， 應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動相去平衡色譜柱；緩沖液濃度太低時，應(yīng)換用＞25mmol/L 的緩沖液；色譜柱被污染或已經(jīng)接近柱壽命時，應(yīng)更換保護柱或換新色譜柱。
保留時間縮短時，流速增加，應(yīng)檢查流速的設(shè)定；柱溫高時，應(yīng)檢查柱的設(shè)置；進樣量太大時，減少樣品用量或降低樣品濃度；流動相的組成發(fā)生了改變，比如流動相中易揮發(fā)有機相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀；流動相的 PH 值應(yīng)保持 3~7.5 范圍內(nèi)，否則會引起柱鍵合相的流失。
保留時間延長時，流速減小，應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露；柱溫低時，檢查
柱溫的設(shè)置；流動相的組成發(fā)生了改變，比如流動相中易揮發(fā)有機相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀；檢查流動相的 pH 值是否 3~7.5 范圍內(nèi)，否則會引起柱鍵合相的流失。
2．2 峰拖尾
色譜柱超載時，要減少進樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱；色譜柱性能不佳時，更換色譜柱；死體積或柱外體積過大時，將連接降至最低，并對所有連接點作合理的調(diào)整，盡可能采用細內(nèi)徑的連接；加入硅羥基，其作用是純化色譜柱，增加緩沖液的濃度，降低流動相的 pH 值，純化樣品；出現(xiàn)峰干擾時，應(yīng)清潔樣品，調(diào)整流動相。
2．3 峰展寬
進樣體積過大時，用流動相配樣；樣品過載時，進小濃度、小體積樣品；在進樣閥中
造成峰擴展時，進樣前后排出氣泡，以降低擴散；流動相粘度過高時，提高柱溫，并采用低粘度流動相；等度洗脫，保留時間過長時，要增加流速或改用梯度洗脫；柱外體積過大時，[1] 將連接管徑和連結(jié)管降至最小 。
2．4基線噪聲
流動相或檢測器中有氣泡時，要對流動相進行脫氣處理；檢測器燈有連續(xù)噪聲時，更
換氘燈；出現(xiàn)由污染引起的隨機噪聲時，應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用 HIPLC 級試劑；偶然有噪聲時，可能是來自電源的干擾，如果電壓不穩(wěn)時，應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。
2．5肩峰或分叉
進樣量太大或樣品濃度過高時，要減少進樣量或稀釋樣品；樣品溶劑太強時，應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑；色譜柱性能欠佳時，應(yīng)更換色譜柱。
2．6鬼峰
色譜柱未達到平衡時，要繼續(xù)平衡色譜柱；樣品中溶劑出峰時，使用流動相作樣品的
溶劑；出現(xiàn)進樣閥殘余峰時，使用強溶劑清洗進樣閥，并改進閥和樣品的清洗程序；流動相用水不合格率，應(yīng)使用 HPLC 級的水。
3 使用注意事項
在使用混合溶劑作流動相時，一定要先混合，再過 0.45um 濾膜；等流動相恢復(fù)至室溫，用超聲波或 He 氣進行脫氣處理后，方可使用。
更換流動相時，必須按一定的程序進行，否則會產(chǎn)生問題。更換流動相有三種情況：互溶性流動相的更換、無互溶性流動相的更換和緩沖溶液的更換。對于第一種情況，先用準備更換的流動相把吸濾器完全清洗干凈，再打開儀器的排液閥，按清洗鍵，清洗泵中的流動相。
將吸濾器放入新流動腥中，減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來清洗色譜柱和檢測器檢測池直到基線平穩(wěn)。對于第二種情況，先用與新舊流動相都互溶的中間清洗液（如：異丙醇）清洗，再用新流動相清洗，具體過程與第一種情況相同。對于第三情況，應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進行清洗，再用新流動相清洗即可。
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